產(chǎn)品詳情介紹
本產(chǎn)品用于對各類生物制品中的E. coli DNA進(jìn)行定量檢測。
本產(chǎn)品原理為利用在PCR體系中加入熒光探針 (TaqMan或Molecular Beacon等)，擴(kuò)增過程中其熒光量與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比，通過熒光量的檢測測定樣品核酸量。本產(chǎn)品中的E. coli qPCR SuperMix (2×)含PerfectStart Taq熱啟動酶 (利用3種單克隆抗體與Taq DNA Polymerase高效結(jié)合，有效地封閉了DNA聚合酶活性，阻止了低溫下的非特異性擴(kuò)增)、針對E. coli DNA檢測特殊優(yōu)化的qPCR反應(yīng)緩沖液、dNTPs、PCR增強(qiáng)劑、穩(wěn)定劑。此外，本反應(yīng)液引入了dUTP/UDG系統(tǒng)，可在反轉(zhuǎn)錄前降解含U的ssDNA和dsDNA，消除由PCR產(chǎn)物導(dǎo)致的交叉污染。
線性范圍廣
以10倍梯度稀釋的E.coli DNA標(biāo)準(zhǔn)品為模板，使用 TransGen 產(chǎn)品進(jìn)行定量檢測。結(jié)果表明，TransGen 產(chǎn)品具有寬廣的線性范圍
專屬性強(qiáng)
使用生物制品生產(chǎn)中常用的工程細(xì)胞基因組DNA對E.coli 檢測試劑進(jìn)行干擾。結(jié)果表明，干擾組與對照組重合，未見干擾。
定量限低
檢測50 fg/μl，40 fg/μl，30 fg/μl，10 fg/μl，5 fg/μl E.coli 標(biāo)準(zhǔn)品。30 fg/μl及以上濃度10個(gè)重復(fù)孔的CV值<20%（參考中國藥典（2015年版）：生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則），即本試劑盒的定量限為30 fg/μl。
耐用性強(qiáng)
將不同超聲條件處理后的E.coli DNA質(zhì)粒進(jìn)行10倍梯度稀釋（500 pg/μl - 50 fg/μl ）并進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，DNA的碎片化不會對檢測結(jié)果造成影響。
穩(wěn)定性強(qiáng)
不同溫度保存
以10倍梯度稀釋（500 pg/μl - 50 fg/μl ）的E.coli DNA標(biāo)準(zhǔn)品為模板，使用經(jīng)不同保存條件處理（4 ℃、 37 ℃保存5天、37 ℃保存2天+4 ℃ 保存3天， - 20 ℃正常保存）的TransGen 產(chǎn)品進(jìn)行檢測， 結(jié)果表明，產(chǎn)品性能不受影響，仍可穩(wěn)定擴(kuò)增。
反復(fù)凍融測試
以10倍梯度稀釋（500 pg/μl - 50 fg/μl ）的E.coli DNA標(biāo)準(zhǔn)品為模板，使用經(jīng)反復(fù)凍融處理的TransGen 產(chǎn)品進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，產(chǎn)品性能不受影響，仍可穩(wěn)定擴(kuò)增。
宿主殘留檢測介紹視頻
